您现在在位置: » 内容
实验技能SOP:大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)
作者: 来源: 2014-08-08

  名称:大鼠灌注取脑 标准操作规程(SOP)

  关键词:大鼠 灌注取脑

  目的: 完整取出大鼠脑部(取材)

  操作步骤

  流程:1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.

  1 多聚甲醛的配置:

  一般方法为:4%多聚甲醛PBS缓冲液配法:称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器(烧杯或烧瓶)中,持续加热磁力搅拌至60~65℃,使成乳白色悬液.用1.0mol/L的NaOH值至7.0,使呈清亮状(滴加),再加入约500ml PBS,充分混匀(在冰浴或冷水浴中),可再检测一下pH,过滤后定容至1000ml,室温或4℃保存备用.

  我们用的方法:加热至60~65℃固然融解的快,不过容易挥发,气味难闻,不是好的选者.我们是这样做的,感觉不错,在此强烈推荐:先配好pbs,称好相应的多聚甲醛,37c水浴或温箱密封放置2天,就能全溶.

  3 麻醉后开胸:暴露充分些容易心脏穿刺及剪开右心耳.箭头所指为右心耳.

  4心尖插入灌注针头,剪开右心耳,开放静脉血.

  5 夹闭腹主动脉:只灌注上肢及头脑,固定的好又快,又省多聚甲醛.多聚甲醛用100ml以下即可.

  6 先灌注生理盐水约100ml,见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛.

  7 灌注成功的标志:刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动(下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全);前肢及颈部僵硬;所灌注的脑组织白而硬.

  8 分离除去后颈部肌肉 .

  9 用弯钳仔细剔除颅骨 .