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2D电泳技术:抑郁大鼠海马的双向凝胶电泳图谱分析
作者: 来源: 2014-06-18

  背景及目的

  抑郁症发病机制不清.结构影像、遗传、神经生化的研究都从不同角度阐述了抑郁症的发病机制,种种证据也显示抑郁症的发病在脑代谢层面是有其器质性基础的,但至今还无明确、统一的结论.蛋白质组学技术为抑郁症发病机制的研究提供了新的手段.本研究通过建立抑郁症的动物模型,利用双向电泳和质谱鉴定技术,分析海马组织差异蛋白质表达,旨在探索抑郁症新的治疗靶点,为建立客观的诊断、治疗、停药指标提供线索.

  方法

  以雄性成年SD大鼠10只,采用慢性不可预见的轻度应激(chronicunp redictable mild stress,CUMS)制作抑郁症模型.将动物予以夹尾1 min、禁水24 h、禁食24 h、45℃环境5 min、昼夜颠倒24 h、水平振荡30 min (160次/min)、4℃冰水游泳5 min,7种刺激每天随机采取1种,共安排3周.经行为学测试:蔗糖水试验和旷野试验(open - field test)评估模型后,三氯乙酸/丙酮沉淀法提取海马组织蛋白质,以固相pH梯度双向凝胶电泳分离蛋白质,考马斯亮蓝 G - 250染色后,应用ImageMaster 2D软件进行图像分析.胰蛋白酶胶内消化,进行MALD I -TOF-MS质谱分析,将得到的质谱数据,去除主要干扰峰后,检索NCB I数据库,鉴定蛋白质.

  结果

  10只大鼠应激后兴趣和快感明显缺乏,活动减少,模型建立成功.双向电泳图谱分辨率高,重复性好.抑郁组平均蛋白质点数为(1 609100 ±1510)点,正常组平均蛋白点数为(1615167 ±29178)点,匹配率72%.其中27个蛋白点在两组间有显著的量的改变,分子量集中在25~70 kD范围内.有差异的27个蛋白点经质谱鉴定和数据库检索,发现了7个蛋白质.分别为铁硫蛋白前体、三磷酸腺苷亚单位B、甲基丙二酸半醛脱氢酶、胰岛素样生长因子、海马胆碱神经刺激肽及两种未知蛋白.结论抑郁症发病机制可能与海马神经发生障碍和能量代谢障碍有关.差异蛋白点有可能成为抑郁症的治疗靶点.