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CTAB/NaCl溶液怎么配?
作者: 来源: 2014-03-11

用CTAB/NaCl法提取大肠杆菌的基因组,请问CTAB/NaCl溶液的具体配方是什么?如何配制?

细菌基因组DNA的微量提取法
本方法通过SDS裂解细胞,蛋白酶降解蛋白,CTAB去除多糖成分
一:仪器:同方法一
二:试剂:TE、TAE缓冲液;10%SDS;5MNaCL;
20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL 4.1gNaCL 溶于80ml水中,缓慢加入10gCTAB,加热溶解);25/24/1,酚/氯仿/异戊醇; 24/1,氯仿/异戊醇;异丙醇;70%及100%乙醇
三:操作
1.5ml 对数生长期细菌细胞
离心,5000rpm,1min

沉淀溶于500μl TE缓冲液中混匀
30μl 10%SDS,3μL蛋白酶K,混匀,37℃,1小时
100μl NaCL(5M) 混匀
80μl的CTAB/NaCL,*混匀;65℃ 10min(可不做)
加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,
离心12000rpm,4-5min
取上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。
注意:
1. *此步操作后,离心管中NaCL的浓度不应低于0.5M,否则DNA将与CTAB共沉淀。
2. 本法适用于从多糖含量高的样品中提取DNA。对于菌体样品,通过此流程,可以获得较为完整的DNA分子。