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免疫检测分析:免疫沉淀知识
作者: 来源: 2014-04-17

  摘要: 下文介绍免疫沉淀的相关知识.

  免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)是利用抗体和抗原的特异性结合研究目的蛋白的理化特性的一种方法.这种方法常被用于蛋白纯化、去除目的蛋白、优化免疫印迹(WB)效果、测定蛋白修饰位点信息、测定蛋白的降解速度、测定酶活等.

  免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质是否在生理条件下有相互作用的有效方法.其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来.如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来.这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用蛋白.

  染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecitation,ChIP)是研究体内DNA与蛋白质相互作用的重要工具.它的基本原理是在生理状态下把细胞内的蛋白质和DNA交联在一起,超声波将其打碎为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过所要研究的目的蛋白质特异性抗体沉淀此复合物,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断进行PCR检测,可以知道目的蛋白与那些基因作用.

  RNA免疫沉淀(RIP)是研究体内RNA与蛋白质相互作用的重要手段.它的基本原理是在生理状态下针对可以结合RNA的蛋白质进行免疫沉淀,然后通过分离抗体-Protein A/G beads复合物中的RNA成份,最后通过基因芯片或者其它手段检测目的RNA.

  由此可见,CO-IP和CHIP以及RIP都是基于IP的基本原理去实现不同的研究目的,CO-IP主要是研究目的蛋白X和与之发生相互作用的蛋白Y之间的作用关系;而CHIP主要是研究目的蛋白X和与之发生相互作用的DNA片段Y之间的作用关系;RIP主要是研究RNA结合蛋白和RNA之间的结合.这也就决定了在进行IP,CO-IP和CHIP以及RIP实验时时操作步骤和涉及的缓冲液配方都有所不同.