您现在在位置: » 内容
免疫检测分析:化学发光免疫测定
作者: 来源: 2014-04-17

  摘要: 化学发光免疫测定是将抗原与抗体特异性反应与敏感性的化学发光反应相结合而建立的一种免疫检测技术.

  化学发光免疫测定(Chemiluminescent immunoassay,CLIA)是将抗原与抗体特异性反应与敏感性的化学发光反应相结合而建立的一种免疫检测技术.

  (一)原理

  化学发光免疫测定(CLIA)属于标记抗体技术的一种,它以化学发光剂、催化发光酶或产物间接参与发光反应的物质等标记抗体或抗原,当标记抗体或标记抗 原与相应抗原或抗体结合后,发光底物受发光剂、催化酶或参与产物作用,发生氧化还原反应,反应中释放可见光或者该反应激发荧光物质发光,最后用发光光度计进行检测.

  (二)标记物

  1、发光剂直接标记:

  常用鲁米诺及其衍生物等,它们属环肼类化合物,能与很多氧化物如氧、次氯酸、磺、过氧化物等反应而发光.因此可直接将鲁米诺或其衍生物标记抗体或抗原进行CLIA.这类方法特异性强,但往往会因交联影响发光物特性,降低敏感性.

  2、发光催化酶标记:

  常用辣根过氧化物酶、丙酮酸激酶、葡萄糖氧化酶等标记抗体或抗原.与酶标抗体测定基本相同,差别在于CLIA是用发光性底物指示反应,有人称为发光酶免疫测定.

  3、标记物产物参与反应:

  标记物不直接催化发光反应,而其反应产物能使反应系统发光.如用草酸类标记抗体或标记抗原,在有过氧化氢作用下,生成二噁二酮,后者可使红荧稀(Rubrene)激化发光.

  (三)应用

  CLIA特异性强、敏感性高,可检测到5-10mmol/L的抗原量.快速,一般几十分钟或1-3小时内完成.操作简便,可进行固相和均相分析.试验重复性好,试剂易标准化和商品化.目前已用于多种药物、激素、病原微生物及其代谢产物、抗体及其它生物活性物质的测定.