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免疫检测分析:甲型肝炎病毒HAVAb-IgM检测
作者: 来源: 2014-04-17

  摘要: 型肝炎病毒属于微小核糖核酸病毒.甲型肝炎病毒的临床常规检测项目主要是检查血清中HAVAb-IgM和HAVAb-IgG.

  甲型肝炎病毒(HAV)属于微小核糖核酸病毒,归类为picorno病毒科肠道病毒属第?2型.HAV含有单股线性RNA基因组,长度约为8 100bp,沉降系数为33—35s.HAV的增殖部位主要在肝细胞的胞浆内,并通过胆汁从粪便排出体外.目前,甲型肝炎病毒的临床常规检测项目主要是检查血清中HAVAb-IgM和HAVAb-IgG.

  [检测方法]: ELISA法

  [方法学原理]:

  在微孔反应板上包被抗人HAV-IgM/J链,加入待测标本,孵育后,力口入HAV—HRP(或HAVAg、HAVAb—HRP).如待测标本中含有 HAVAb—IgM时,就能与包被抗人HAVqgM弘链、HAV—HRP(或HAVAg、HAVAb—HRP)结合,在TMB底物作用下产生显色反应.反之,则无显色反应.

  [标本准备]: 静脉血2ml,不抗凝.

  [试剂]:

  1、预包被微孔反应板

  2、酶结合物

  3、阳性对照物

  4、阴性对照物

  5、浓缩洗涤液

  6、显色剂A、B

  7、终止液

  [仪器]: 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪.

  [检测步骤]:

  1、在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、阳性对照物、阴性对照物各50ul.

  2、置37℃环境中温育20min.

  3、将孔内液体吸干,用洗涤液充分洗涤5次,干燥.

  4、每孔加入酶标试剂50t~l,轻轻振荡混匀.

  5、置37℃环境中温育20min.

  6、将孔内液体吸干,用洗涤液充分洗涤5次,干燥.

  7、每孔加入显色剂A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃环境中避光显色10min.

  8、加入终止液50Fl后,轻轻振荡混匀.用酶标仪(450nm波长)测定各孔吸光度,大于临界值判为阳性,小于临界值判为阴性.

  [正常参考值]:

  HAVAb—IgM阴性(注意事项):

  1、试剂盒从冷藏环境中取出时应室温平衡30min后方可使用,未用完的微孔条用自封袋密封保存.

  2、酶标板洗涤时各孔均需加满洗涤液,防止孔内有游离酶不能洗净.应设定30—60s的洗涤浸泡时间.

  3、滴加试剂前应将滴瓶翻转数次,使液体混匀.滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确(注意:勿将试剂滴在孔壁上).

  4、所有样品和废弃物都应按传染源处理.终止液为2mol/L硫酸,使用时应注意安全.

  5、须排除RF及其他原因引起的假阳性.

  [临床意义]:

  HAVAb-IgM是诊断甲型病毒性肝炎的早期特异性指标,患者发病最初3周内可检出HAVAb-IgM,随后3个月左右逐渐消退.HAVAb—IgM阳性提示HAV急性感染,可用于甲型肝炎的早期诊断.