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免疫检测分析:时间分辨荧光免疫分析技术在HBVM检测中的应用
作者: 来源: 2014-04-17

  摘要: 本文用这两种方法检测HBVM,旨在探讨二者之间的关系及临床应用.

  我国是乙型肝炎高感染的国家.有资料显示,全国人口中有10%以上为乙肝携带者,感染率非常高,而低浓度在人群中的分布率为0.53%[1].目前常规的ELISA检测方法容易造成漏诊[2],在临床上应用有一定局限性.随着免疫技术的不断发展,抗原抗体检测灵敏度得到了明显提高,而TRFIA是一种高灵敏、准确、快速的方法,可以较大的减少漏诊.本文用这两种方法检测HBVM,旨在探讨二者之间的关系及临床应用.

  一、材料与方法

  (1)研究对象

  采用我院门诊及住院患者102例,其中男61例,女41例,年龄9岁~51岁,平均(284±17.7)岁.

  (2)仪器和试剂

  TRFIA法使用上海新波生物技术有限公司生产的Anytest-2000型时间分辨荧光免疫分析系统及配套试剂.ELISA法使用奥地利BIOELLHTⅡ型自动酶标仪,试剂由兰州标佳生物技术有限公司提供.

  (3)检测方法

  102例血清标本同时使用TRFIA及ELISA两种方法检测.

  (4)统计处理

  测定结果用配对资料χ2检验统计.

  二、结果

  (1)对102份血清标本同时使用TRFIA和ELISA两种不同方法测定,对产生的各种乙肝医学模式进行比较.检测时,将抗原抗体排序:以 HBsAg为1,HBsAb为2,HBeAg为3,HBeAb为4,HBcAb为5.其中1、5阳性模式检出率分别为3.92%,10.78%,差异有显著性(P<0.05),其他医学模式差异均无显著性(P>0.05).

  (2)对HBVM中的各项目用这两种方法检测的结果进行对照.TRFIA法的检测阳性率均略高于ELISA法,但都差异无显著性(P>0.05),对HBsAg、HBsAb、HBcAb的检出符合率为100%.HBeAg、HBeAb用ELISA法检出率相对较低,漏检率为 7.84%(8/102).

  三、讨论

  HBVM的变化是评估乙型肝炎感染后病情转归的重要依据,也是抗病毒治疗的疗效考察指标之一,目前国内检测HBVM使用较多的仍是ELISA法,主要有以下缺点:无法定量;灵敏度低;由检测原理带来的前带现象无法解决;易传染,无法完成HBV感染的动态观以及低水平HBV感染指标检测.

  本研究显示,TRFIA法对HBVM的检出率与ELISA法虽差异有显著性(P>0.05),但TRFIA法还是高于ELISA法,以 TRFIA为标准,ELISA法对HBVM的检出符合率分别为100.00%、100.00%、73.33%、88.24%、100.00%,由此可见,对于TRFIA法而言,ELISA法漏检的指标主要集中在HBeAg和HBeAb这两个项目上,总漏检率为7.84%.究其原因,主要是因为TRFIA的灵敏度较高,使其能检测到低浓度的抗原和抗体,初步解决了隐源性肝炎中HBV标志物检测的问题.

  TRFIA法是近年来发展的无污染、高灵敏度的免疫标记检测技术.因稀土离子本身激发光谱宽而产生荧光发射光谱窄,从而保证了该技术的高精密度,以稀土离子为标记物,通过时间延迟技术,去除了非特异性荧光干扰,明显提高了检测灵敏度,并通过激发光与发射光之间较大的STOKES位移,提高了光谱的分辨率,使特异性明显增强,又采用了独特的荧光解离增强技术,可使有效荧光的效率增强约100万倍,从而使灵敏度增高,并具有定量检测功能[3].

  有文献[4]报道,TRFIA对HBsAg的最小检测浓度可达到0.05 ng/ml,比ELISA法约高10倍.就乙肝医学模式而言,本研究显示:ELISA法检测1、5阳性者及2、5阳性者的人数要高于TRFIA法,并且两种方法在前者的检测率上差异有显著性(P<0.05),TRFIA法在其他模式上的检出人数均高于ELISA法,主要还是由于ELISA法检测 HBeAg与HBeAb的阳性例数较低所致,故使乙肝医学模式的鉴定有所差异,并将可能造成临床诊断及治疗的失误.

  有资料报道[5],5%~10%的普通人和98%的新生儿在感染HBV后都有能力清除病毒,因此成为慢性携带者.有1/3的HBsAg携带者中的慢性肝炎会在5 a~10 a中转变为肝硬化,如果HBsAg持续6个月以上,就会出现携带状况,当HBsAb浓度至少为100 U/L时,对病的免疫力可维持10 a.因此检测的灵敏度与准确性就至关重要,TRFIA法就充分显示出了这一方面的优势,它对HBVM有以下临床意义:可以了解药物疗效为医生治疗提供依据;有利于病情动态观察,为治疗方案提供线索;有利于对免疫状况进行评估,为注射乙肝疫苗提供指导.

  总之,TRFIA较ELISA结果稳定,并可定量分析,近年来TRFIA技术应用范围不断扩大[6,7],在微量分析中有着广泛的应用前景.

  参考文献:

  [1]王跃国,王惠民,毛利萍,等.MEIA法测定乙肝病毒表面抗原的评价及临床应用[J].现代检验医学杂志,2004,19(2):2123.

  [2]张运洪,秦苏,何静波,等.ELISA法结合MEIA能有效检测低水平HBsAg[J].临床检验杂志,2002,20(2):103.

  [3]李振甲,陈沣藻,高平.时间分辨免疫技术与应用[M],北京:科学技术出版社,1996:2126.

  [4]额尔敦,其其格,郭美香,等.双抗HgsAg抗体夹心时间分辨免疫荧光分析方法的建立[J].中国免疫学杂志,1999,15:808.

  [5]魏来,陶其敏.努力规范肝脏疾病免疫学诊断[J].中华检验杂志,2003,26:6971.

  [6]顾爱萍,李庆国,王桂兰,等.丙型肝炎病毒抗体的时间分辨荧光分析方法检测[J].临床检验杂志,2001,19(4):215.

  [7]黄飚,肖华龙,朱利国,等.糖蛋白抗原199时间分辨荧光免疫分析[J].中华检验医学杂志,2000,23(3):171.