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PRC技术:PCR扩增的重要标准
作者: 来源: 2014-04-14

 什么是PCR实验的灵敏度?
    灵敏度指的是PCR扩增反应能够检测到目的基因的最小值.研究结果表明,影响PCR扩增效率的因素,如模板的复杂程度与完整性、引物的纯度及其与模板的结合效率、反应温度、DNA聚合酶的热稳定性与扩增性能、反应缓冲液的离子组 成(主要指阳离子)、反应优化剂等等,都决定了PCR实验的检测灵敏度.在最佳的扩增条件下,常规PCR反应能够检测到的pg(10-12g)数量级的目 的基因.对于一个特定的目的基因而言,模板与引物通常都是已经限定好的因素.因此,选择什么样的PCR反应体系(包括DNA聚合酶与反应缓冲液等)就是研究者提高PCR实验灵敏度的关键因素了.
    与实验室自配的PCR扩增体系相比,东盛的Taq Mix对反应缓冲液中的成分进行优化,并加入了适当比例的反应增强剂(PCR Enhancer),提高了DNA聚合酶的热稳定性,显著降低模板的二级结构对PCR扩增性能的影响,使得DNA聚合酶处于最适活性状态,从而获得了比自 配体系更高的检测灵敏度.即时反应体系中只有几个目的基因的拷贝,也能轻松检测.
什么是PCR实验的特异性
    特异性指的是在PCR扩增过程中,专一性地扩增目的片段而非其他片段的性 能.在PCR实验本身的灵敏度很高,且实验条件未充分优化的情况,通常会在目的片段出现的同时伴随有其他的杂带,即发生非特异性扩增的现象.模板、引物性质及质量、反应条件的控制等均会影响PCR扩增的特异性.近年来的研究结果表明,缓冲液的品质(如离子种类与组成,反应优化剂等)对保证PCR的特异性扩 增起着不可忽视的作用.一般的缓冲液中调节氢键作用的盐只有KCl,而东盛HSTM TaqMix的缓冲体系通过反应优化剂以及KCl/(NH4)SO4盐离子体系的平衡调节,显著提高了PCR扩增的特异性,降低背景.    
    PCR实验的灵敏度与特异性是一对此长彼消的特性,这也决定我们实验体系调节实际就是找到适合实验的灵敏度与特异性的平衡点.由于PCR体系中的众多成分,使得组合较多,筛选工作繁杂.东盛基于灵敏度与特异性分别设计了PCR Mix和HS Taq Mix,帮您确定大的平衡点,如果您需要更细致的平衡点,请选择相应的Mix Kit系列进行微调.