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PriCells: 动物小血管内皮细胞的分离
作者: 来源: 2014-07-15

  实验材料:

  1. 兔、狗或大鼠等动物

  2. 1×PBS,含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml,pH7.4

  3. 0.2%Ⅰ型胶原酶

  4. 眼科剪,眼科镊

  5. 慕丝线(7号线)、细铁丝

  6. 离心管(15ml、50ml)

  实验方法:

  1. 处死动物后,局部消毒取出主动脉,用加入抗菌素的PBS冲洗,放入盛有PBS的平皿中,摘除血管外的脂肪和结缔组织。

  2. 用细丝线结扎血管的一端,用镊子轻轻夹住结扎侧的末端,用一铁丝将扎住的末端捅进血管内,将血管翻转过来,使内皮细胞面向外。血管另一侧的末端也塞进血管内,用细丝线结扎住,使整个血管仅内皮细胞暴露在外面。

  3. 把血管放至盛有5mol 0.2%胶原酶的平皿中,置于37℃ CO2  孵箱中消化10-15min,多次摇动平皿,以便内皮细胞脱落。消化近结束时,在倒置显微镜下观察,若大部分内皮细胞已脱落,加少量培养液终止消化。

  4. 将消化液收集到离心管中,1000r/min离心5min。加入培养基重悬制成细胞悬液,放入T25的细胞培养瓶中,置于37℃,含5%CO2 的孵箱中培养。2天换液1次。