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正常小鼠原代破骨细胞培养方案
作者: 来源: 2014-07-15

  实验材料:

  1.  正常小鼠乳鼠颅盖骨组织 ;

  2.  不含Ca 2+ 和Mg 2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2;

  3.  0.1% Ⅰ 型胶原酶 ;

  4.  培养器具:培养瓶或皿( 用多聚赖氨酸包被) 、200目不锈钢网筛、眼科剪、镊子等;

  培养方法:

  1.  选用出生1-3天小鼠乳鼠,处死,放入75%酒精中浸泡2—3分钟,转至超净工作台内,取颅盖骨;

  2.  将组织放入 含有1×PBS(pH7. 2 ) 中冲洗3次;

  3.  用眼科剪将颅盖骨剪成 1 ×1 mm3 大小组织块 ,转至15ml离心管内,加入0.1%Ⅰ型胶原酶, 37℃ 水浴消化90min;

  4.  加入含血清的培养基 , 终止 酶反应 ;

  5.  将消化后的组织过200目网筛, 收集 滤液 于 15ml 离心管中,1000rpm /min 离心10min,弃去上清,加入培养液重悬,染色计数细胞 ;

  6.  调整细胞密度以 合适的密度 接种入培养瓶 , 放置于37℃,5%CO2 培养箱中 培养。 待细胞长满瓶皿的生长表面即可传代;