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正常人组织源性鼻咽上皮细胞的培养
作者: 来源: 2014-07-15

  实验材料:

  1.  一般来自鼻咽癌活检组织或引产胚胎的鼻咽组织;

  2.  不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2;

  3.  培养基:可使用ROMI1640培养液,添加20%胎牛血清、5μg/ml胰岛素、2.7×10 -7  mol/L氢化可的松。也可用DMEM培养液;

  4.  低血清培养液与无血清培养液:基础培养液均为DMEM/F12(1:1,V/V)混合液。配置时,添加1.2g/L NaHCO 3 及15 mmol/L HEPES。低血清培养液是在基础培养液中再加入5μg/ml胰岛素、5ng/ml表皮生长因子、0.3mg/ml谷氨酰胺、100 IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素、5×10 -7  mol/L氢化可的松以及1.25%胎牛血清。若去掉低血清培养液中的胎牛血清,再加1mg/ml牛血清白蛋白及10μg/ml转铁蛋白,即为无血清培养液;

  5.  消化液:0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶溶液,用D-Hanks液配制;

  实验方法:

  1.  取胚龄4—6个月水囊引产的胚胎,在无菌条件下分离鼻咽粘膜。若取材于鼻咽癌活检组织,则须将组织置于含高浓度抗生素(青霉素500 IU/ml、链霉素500μg/ml)的Hanks液中,在4℃下处理1小时;

  2.  用Hanks液(含青霉素100 IU/ml、链霉素100μg/ml)漂洗2次,除去血块;

  3.  将所取材料剪成0.5—1mm 3 的碎片,再用Hanks液充分漂洗;

  4.  将植块种植到培养瓶内作干贴壁。翻转培养瓶,在瓶中加入2mlRPMI 1640培养液,在37℃培养箱中静置数小时;

  5.  待植块牢固贴壁后,轻轻翻转培养瓶,使培养液均匀覆盖住植块。在37℃、5%CO2 的培养箱中继续培养; 培养24小时后换液,去除未贴壁细胞后继续培养,以后每周换液2—3次;

  6.  3天后,去除未贴壁的植块。每3天换半量培养液。