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人角质形成细胞的分离培养
作者: 来源: 2014-07-15

  实验材料:

  1. 早产儿或死亡胎儿的皮肤,也可用手术取下的成体皮肤

  2. 1000000U/L中性蛋白酶,0.25%胰蛋白酶

  3. MEM和HBSS混合液,添加20mmol/L HEPES、200000IU/L青霉素和200mg/L链霉素和1.5g/L庆大霉素

  4. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊

  5. 离心管(15ml、50ml)

  实验方法:

  1. 取厚1.5mm的皮片,用4℃MEM和HBSS混合液冲洗获取的皮肤材料3次。将皮肤置于培养皿中,用镊子和眼科剪仔细分离皮肤和皮下组织,去除脂肪和疏松结缔组织。

  2. 将皮肤展评,用手术刀切成2-3mm2的小片,放入中性蛋白酶消化液中,4℃下消化15-20h,或37℃下消化2-4h。

  3. 用无菌针头和眼科镊子分离真皮与表皮。表皮薄而透明,真皮厚且轻微肿胀的凝胶状。

  4. 将分离出的表皮块用0.25%胰蛋白酶,在37℃下振荡消化10-20min后,加入含10%胎牛血清的培养基终止消化。

  5. 1500r/min分离心5min,吸去上清液,用培养液重新悬浮沉淀细胞,用吸管轻轻吹散细胞,细胞计数。

  6. 调整细胞密度至1.5×105个/ml,植于塑料培养皿培养,也可与滋养层细胞共同培养。当细胞生长覆盖至培养皿底壁面积的70%-80%时,可进行传代培养。