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牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法
作者: 来源: 2014-07-15

  实验材料:

  1. 牛或猪

  2. PBS,含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml

  3. 0.1%Ⅰ型胶原酶

  4. 眼科剪,眼科镊

  5. 慕丝线

  6. 离心管(15ml、50ml)

  实验方法:

  1. 分离牛或猪的主动脉等大血管,长15-20cm,用丝线结扎血管各分支后,取出主动脉。放入盛有含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml的PBS平皿中,纵向切开血管壁,内皮朝上,用PBS冲洗3次。

  2. 在另一平皿中加入少量0.1%Ⅰ型胶原酶溶液。37℃下消化5-10min,然后加入培养液终止消化。

  3. 刮取内皮细胞。用刮刀轻轻刮内膜表面,刮刀与血管表面成60°,刮刀要轻而均匀地推进。不可刮得过深,也不要刮到血管的边缘处,以免成纤维细胞被污染。

  4. 将刮下的内皮细胞悬液浮于培养液中,1000r/min,离心10min。吸去上清;再加入15ml培养液,用滴灌轻轻吹打,以便分散细胞团,再离心1次,并吸去上清。加入5ml培养液悬浮细胞,制备细胞悬液。