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人或动物肺毛细血管原代内皮细胞的分离
作者: 来源: 2014-07-15

  实验材料:

  1.  人或动物的肺部毛细血管

  2.  PBS,含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml

  3.  3mg/ml中性蛋白酶、0.25%胰蛋白酶

  4.  眼科剪,眼科镊

  5.  20μm尼龙筛、100μm尼龙筛

  6.  离心管(15ml、50ml)

  实验方法:

  1.   将动物麻醉后开胸取肺组织,将肺组织切成1cm3 的小块,用PBS冲洗干净。剪去胸膜,剔除大血管。

  2.  用匀浆机制备肺组织匀浆,然后放在20μm尼龙筛上冲洗,以去掉红细胞和组织碎片。

  3.  消化肺组织:将留在筛子上的组织悬浮于3mg/ml中性蛋白酶的培养液中,在37℃恒温振荡器中孵育16h。将消化液装入离心管中离心(2000r/min,10min),沉淀物悬浮于含1mmol/L EDTA的0.25%胰蛋白酶液中,37℃孵育15min。

  4.  加入完全培养液终止胰蛋白酶消化,通过100μm尼龙筛,以去除结缔组织碎片。将滤过液以2000r/min离心10min,并悬浮于培养液中,可进行细胞培养。