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细胞内糖类染色方法—过碘酸席夫反应法
作者: 来源: 2014-07-15

  基本原理:

  过碘酸是一种强氧化剂,过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基,乙二醛基继而与Schiff试剂结合,Schiff试剂本为无色亚硫酸品红复合物,但它与乙二醛基结合后形成紫红色反应物。颜色反应的深浅取决于组织内多糖(包括糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖脂等)的乙二醇分子的多寡。

  试剂

  1. 席夫试剂的制备

  ① 称取0.5g碱性品红加入100ml沸水中,不断搅拌下煮5min,使其充分溶解;

  ② 待溶液冷却至50℃时过滤,加入浓度为1mol/L的HCl 10ml;

  ③ 当溶液冷却至25℃时再加入0.5g偏重亚硫酸钠,在室温下放置24h,其颜色呈褐色或淡黄色;

  ④ 再将0.5g活性炭加入呈色液中振摇1min后过滤,滤液为无色;

  ⑤ 将滤液置于棕色瓶内于4℃密封保存,一般可保存数月;

  2. 卡诺固定液配制

  将30ml氯仿和10ml苯乙酸加入60ml纯乙醇中即得;

  3. 甲醛钙固定液配制

  甲醛10ml和1g CaCl2 混合加水定容至100ml即得。

  染色步骤:

  1. 用Hanks液将盖玻片漂洗3次;

  2. 用卡诺(Carnoy)固定液或甲醛钙固定液固定5—10min;

  3. 加入0.5%过碘酸作用10—15min;

  4. 用蒸馏水漂洗1—2min;

  5. 移入席夫试剂中作用15—30min,盖片样品稍稍变红;

  6. 用自来水漂洗5—10min,盖片样品变红;

  7. 用蒸馏水反复冲洗;

  8. 用50%、70%、80%、90%、95%、100%的梯度乙醇逐级脱水各2min;

  9. 用二甲苯透明,用光学树脂封片后观察;

  结果:

  细胞含糖区呈紫红色。细胞核呈粉红色至紫红色,胞质无色。