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体外诊断之侧向层析技术
作者: 来源:生物谷 2017-09-14

侧向层析技术是20世纪90年代在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术,具有快速、简便、单人份检测、经济的优点(图1),现已广泛应用于医学检测、食品质量监测、环境监测、农业和畜牧业、出入境检验检疫、法医定案等领域。

 

图1:免疫层析试纸条

侧向层析技术以大孔径的微孔滤膜(NC膜、硝酸纤维素膜)为载体,将特异性的抗原或抗体固定在NC膜上,当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后,通过毛细作用侧向移动,与结合垫上的胶体金或微球标记的试剂发生特异的免疫反应,再移动到NC膜上,被固定在NC膜表面的抗原或抗体捕获,聚集在检测带上,通过目测硝酸纤维素表面标记物(胶体金或乳胶颗粒)的光反射信号的密度得到直观的显色结果。其它未结合的标记物则越过检测带,流入吸水垫中,达到自动分离的目的(图2)。

图2 免疫层析试纸条的结构

随着免疫检测技术的飞速发展,定量、高灵敏度、多元检测、系统集成化,开始成为IVD领域新的研究方向热点,与传统的ELISA和胶体金定性侧向层析检测相比,基于微球的定量侧向层析检测具有稳定性好,线性范围宽,灵敏度高等诸多优点。制备Estapor纳米微球的常用材质为聚苯乙烯(PS)或者聚苯乙烯与其他化合物如二乙烯苯组成的复合材料。对于微球表面无任何功能基团修饰的微球,抗原或抗体通过被动吸附作用固定在微球表面,工艺简单。对于有功能基团修饰的微球,抗原/抗体可通过共价交联的方式固定在微球表面。抗原/抗体的共价交联方法主要有两种,一种是两步法,交联前微球需先激活,例如-COOH羧基修饰的微球可用NHS/EDC活化;另一种是一步法,微球交联前只需更换缓冲液的pH值即可活化,操作十分方便,如氯甲基、甲苯磺酰基、环氧基修饰的微球就属于此类。抗原或抗体偶联到微球表面后可通过离心、透析或者超滤去除未交联的抗体/抗原 ,然后再使用超声重新分散。

微球是定量侧向层析检测的核心原料,对定量层析产品的性能有重要的影响,Micheal Mansfield 博士将于10月19日在2017默克生命科学体外诊断技术国际研讨会和体外诊断行业研究者进行分享。