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基础 | 丙型肝炎感染检测方法一览
作者: 来源:医脉通 2017-06-13

丙型肝炎呈全球性流行,据世界卫生组织统计,全球HCV的感染率约为2.8%,估计约1.85亿人感染HCV,每年因HCV感染导致的死亡病例约35万例。由于HCV感染具有隐匿性,多数感染者并不知道感染HCV。


HCV属于黄病毒科肝炎病毒属,其基因组为单股正链RNA,基因组含有一个开放阅读框(ORF),编码10余种结构和非结构(NS)蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B),NS3/4A、NS5A和NS5B是目前直接抗病毒(DAA)的主要靶位。HCV基因易变异,目前可至少分为6个基因型及多个亚型,按照国际通行的方法,以阿拉伯数字表示HCV基因型,以小写的英文字母表示基因亚型(如1a、2b、3c等)。丙型肝炎病毒(HCV)感染是急性和慢性肝病的常见病因,通常临床症状不明显。然而,慢性丙型肝炎可导致肝硬化、终末期肝病和肝细胞癌(HCC)。丙型肝炎病毒检测在丙型肝炎病毒感染诊断、分类及管理中起着重要作用。


HCV感染检测方法


下列检测方法可用于诊断和管理丙型肝炎(HCV)感染:


▲ 血清学检测:检测血清或血浆中的丙型肝炎病毒特异性抗体 (抗-HCV),报告阳性或阴性结果。


血清学检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV),用于筛查与诊断丙型肝炎病毒感染,结果报告为抗-HCV阳性或阴性。不同的临床应用检测方法,如化学发光免疫分析法CIA,或者酶免疫法EIA等检测方法均可用于HCV感染者的筛查,均具有较高的特异性与敏感性。快速诊断测试(RDTs)可以被用来初步筛查抗-HCV。


阴性检测不足以排除慢性HCV感染。一些血液透析和自身免疫性疾病患者可能出现抗-HCV假阳性结果,免疫功能缺陷或合并HIV感染者可能出现假阴性结果,急性丙型肝炎患者可因为抗-HCV检测处于窗口期出现抗-HCV阴性。


▲ 分子检测:检测病毒核酸(HCV RNA),分为定性检测或定量检测。病毒载量的数量单位为IU/mL。


对于抗体阳性者,应进一步进行HCV RNA检测,以确定是否为丙型肝炎患者。血清抗-HCV滴度越高,HCV RNA检出的可能性越大。HCV RNA分子检测包括:定性检测或定量检测。


定性试验用于检测是否存在HCV RNA (特异性约为98%) 。定量检测用于检测具体的病毒载量(特异性约为98-99%) ,应当采用基于PCR扩增、灵敏度和精确度高并且检测范围广的方法,其检测结果采用IU/ml表示。HCV RNA定量检测适用于HCV现症感染的确认、抗病毒治疗前基线病毒载量分析、以及抗病毒治疗过程中及治疗结束后的应答评估。


上述两种类型的检测均可用于识别急性或慢性HCV感染。急性HCV感染暴露2周内,可在血清中检测到HCV RNA。另一方面,可能需要大约 8-12 周才会出现抗-HCV阳性结果。然而,急性感染的病毒清除期,可出现HCV RNA检测不到、抗-HCV阳性结果,即导致假阳性结果;这也可能发生于HCV感染恢复与HCV感染后的自发缓解。


▲ HCV基因分型:在流行病学研究中作用重大,临床上用于预测应答的可能性和治疗持续时间;基因型测定帮助临床医生将病毒分为 6 主要基因型。


HCV RNA 基因分型的方法有分子生物学和血清学两大类,前者包括DNA测序法、型特异性引物扩增法、基因芯片、探针杂交等,后者是合成HCV特异性多肽来检测其特异性的抗体从而区分基因型,但不能区分亚型。国内外在抗病毒疗效考核研究中,应用Simmonds1~6 型分型法最为广泛。HCV RNA基因分型结果有助于判定治疗的难易程度及制定抗病毒治疗的个体化方案。


血样收集


使用血清分离胶管或血清分离采血器收集3.5 ml血液。患者不需要特殊准备。血液样本应进行离心和冷藏或冷冻,以便于运输和稳定。


成年人接受HCV RNA 聚合酶链反应 (PCR) 检测,应使用EDTA管收集 4-6ml血液。婴儿使用儿童EDTA管收集2 ml血液。收集血液后,血样必须立即送往实验室处理。实验室人员于室温下在6小时内采用离心法将血浆从全血分离。


针对HCV基因分型,使用EDTA 管收集 6 ml患者的血液样本。血浆必须在4小时内进行分离和冷冻;为了方便运输与稳定,血液必须进行离心及冷冻。


美国肝病研究协会(AASLD)建议对高危人群进行筛查,高危人群包括静脉注射毒品者、接受过血液成分输血或器官移植的个体、不明原因的氨基转移酶水平(AST/ALT)升高个体、血液透析患者、丙型肝炎病毒感染母亲、艾滋病毒感染者、针头刺伤或暴露于HCV阳性血液的保健和其他工作人员以及目前有HCV感染性伴侣的个体。


参考文献:


1. 中华医学会肝病学分会, 中华医学会感染病学分会.丙型肝炎防治指南(2015年版). 《中国肝脏病杂志(电子版)》2015,7,(3):19-35.

2. Hepatitis C Test.Medcape.2015.